将流式细胞术检测从实验室推广到临床应用
流式细胞术检测广泛应用于从靶标识别到命中验证和先导化合物优化等各阶段的临床前药物开发研究中 1。根据治疗方式的不同,流式细胞术检测也可以成为药理学和毒理学研究的重要组成部分。例如,像嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法这样的基因修饰细胞疗法,以及靶向细胞表面蛋白的抗体偶联药物 (ADC) 等复杂治疗手段,都需要在临床前和临床研究中使用流式细胞术检测。CAR-T 疗法在血液系统恶性肿瘤中已显示出临床成功,自体细胞疗法(如 Kymriah、Abecma 和 Yescarta 等)已被用于特定肿瘤患者群体2。此外,还有大量的药物开发工作致力于开发同种异体 CAR-T 细胞疗法,以实现更大规模、适用于更广泛患者群体的治疗。流式细胞术检测有多种应用,包括检测和定量基因修饰的 CAR-T 细胞,以及监测嵌合抗原受体 (CAR) 表达水平作为疗效的生物标志物。此外,流式细胞术检测可用于监测下游效应,如细胞因子释放以及免疫原性等毒副反应。
使用抗体偶联药物(ADCs)的主要优势在于将化疗药物靶向递送至肿瘤细胞,以最大限度提高疗效并降低毒性。ADC 中的靶向抗体与肿瘤细胞上优先表达的细胞表面抗原结合,从而触发 ADC 复合物的内化。一旦复合物被内化,化疗药物负载物就会诱导肿瘤细胞死亡。流式细胞术是一种可靠且定量的方法,可用于测量肿瘤细胞和正常细胞上的靶抗原水平,如果 ADC 标记有荧光报告基因,还可用于监测内化效率和药物释放情况1。由于流式细胞术能够检测单细胞水平的变化,因此也可以评估 ADC 的旁观者效应——即其杀伤邻近肿瘤细胞的能力,这是一个重要的疗效评估指标1。
显然,流式细胞术组合和检测将继续广泛应用于特定治疗方式的临床前药物开发。流式细胞术组合还有另一个非常重要的优势——它具有很高的临床转化价值。用于临床前研究的多重流式细胞术组合可以在临床研究中用于监测疾病进展、治疗效果和毒性反应。一项重要进展是贝克曼库尔特(Beckman Coulter)的 DxFLEX 临床流式细胞仪获得了FDA 的 510(k)认证,允许将该流式细胞仪用于临床研究3。在临床中进行流式检测需要使用经过临床认证的仪器。另一项要求是制定标准化流程,以确保检测之间的最小差异。目前已有多个科研团队正在制定用于开展临床流式细胞术检测的标准操作规程 (SOP)。临床流式细胞术检测的关键考量因素包括检测的灵敏度和可重复性、标准化数据分析以及可管理的样本处理和分析流程4。流动检测会生成大量数据,而数据分析往往具有一定的主观性。例如,用于细分特定细胞群的门控策略可能因实验室、使用者、分析工具等的不同而有所差异。虽然主观分析在临床前环境中是可以接受的,但临床样本的数据分析必须遵循可靠的标准流程,确保样本间几乎没有差异。目前,多个团队正在通过自动化以及为每项检测制定特定的分析流程,来推进流式面板数据的标准化5。专注于流式细胞术的公司也在开发检测专用试剂盒,以最大限度地减少样本处理和湿实验室分析的差异,因为成套解决方案是实现多个实验室和操作人员之间检测标准化的有效方式。目前,流动面板在临床中的使用有限,但随着端到端临床工作流程的建立,应用率预计将会上升。根据近期的发展,流式细胞术组合很可能继续成为临床前药物开发的标准检测方法,并且部分组合可能会推广到临床试验中,用于监测治疗效果和毒副作用。
参考文献:
1https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC11011675/
3https://www.ddw-online.com/flow-cytometry-shining-a-light-on-new-therapeutics-32158-202410/